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Worthington組織消化指南
引言
組織消化酶主要用于組織培養(yǎng)和細胞生物學研究的原代細胞的分離和收集。盡管這些消化酶已經(jīng)普遍應用多年，但是對其組織消化和細胞收集的作用機制卻沒有全面的理解。 由此導致的結(jié)果便是選擇一種消化方法大多是隨機選擇或基于過去的經(jīng)驗，而不是在*理解消化原理的基礎(chǔ)上選擇的消化方案，以及如何根據(jù)具體實驗目的修正消化方案以獲得更好的實驗結(jié)果。
細胞分離程序的目的是zui大程度的獲得功能活性的單個細胞，而影響結(jié)果的原因有很多，包括（不限于）以下：
1、組織類型
2、物種來源
3、動物年齡
4、遺傳改造情況（如knockouts）
5、所用的消化培養(yǎng)液
6、所用的酶
7、消化酶中的雜質(zhì)
8、所用消化酶的工作濃度
9、溫度
10、孵育時間
通常前四個原因沒辦法選擇，而剩下的原因一般由經(jīng)驗決定以獲取zui適實驗結(jié)果。
通過查閱文獻來選擇*組織消化酶和zui適消化條件的研究人員通常被互相矛盾的實驗數(shù)據(jù)搞得一頭霧水。這些巨大差異來源于組織胞外基質(zhì)的復雜而動態(tài)的特性，以及過去常用的粗制、未提純的組織分離酶。另外，組織胞外基質(zhì)由各種蛋白、糖蛋白、脂類和糖脂組成，這些成分的組成比例在不同物種、不同組織、甚至不同發(fā)育（年齡）之間存在明顯的差異，這些因素都極大的影響了消化方案的制定。目前通常使用的粗制酶，如鏈霉蛋白酶、NF1:250、以及含有幾種其他不同濃度蛋白酶的膠原酶、以及各種多糖酶、核酶和脂酶。
本指南總結(jié)了目前常用組織消化酶的zui適消化和細胞收集知識和方法，描述了標準的實驗步驟， 以便于制定一個*的細胞分離方案，同時列舉了一些相關(guān)的參考文獻。
下表列出多種組織的適宜消化酶（含參考文獻，以組織類型和物種分類，詳見鏈接）
脂肪組織 | 腎上腺組織 | 骨組織 | 腦組織 |
軟骨組織 | 結(jié)腸組織 | 內(nèi)皮組織 | 上皮組織 |
眼 | 心臟 | 腸 | 腎 |
肝 | 肺 | 淋巴結(jié) | 乳腺 |
其它組織 | 其他組織 | 肌組織 | 神經(jīng)組織 |
胰腺 | 腮腺 | 垂體 | 前列腺 |
生殖 | 動物鱗片 | 皮膚 | 脾臟 |
干細胞 | 胸腺 | 甲狀腺/甲狀旁腺 | 扁桃體 |
腫瘤 |
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注：使用Worthington公司消化酶的文獻不限于上表鏈接中所列，一般而言，Worthington公司的組織消化酶可用于大多組織類型的消化。
垂體組織消化手冊
| 物種 | 詳細來源 | 細胞名稱 | 消化用酶 | 培養(yǎng)基 | 參考文獻 |
| 牛 | 牛犢, 雄性,不到6個月大 | Pituitary | Collagenase: 0.3% | DMEM | Hassan, H., and Merkel, R.: Perifusion Model System to Culture Bovine Hypothalamic Slices In Series with Dispersed Anterior Pituitary Cells, In Vitro Cell Dev Biol 30A, 435, 1994 |
| 牛 | 牛 | Pituitary | Collagenase: 0.1% | EBSS, CMF | Mason, W. and Ingram, C.: Techniques for Studying the Role of Electrical Activity in Control of Secretion by Normal Anterior Pituitary Cells, Vol. 124,, , 207, 1986 |
| 牛 | 牛 | Follicular, anterior pituitary and pars tuberalis | Deoxyribonuclease I: 200 礸/ml | HBSS, CMF | Ferrara, N., Goldsmith, P., Fujii, D., and Weiner, R.: Culture and Characterization of Follicular Cells of the Bovine Anterior Pituitary and Pars Tuberalis, Vol. 124,, , 245, 1986 |
| 牛 | 牛犢, 雄性, 1-6 周大 | Pitituary | Hyaluronidase: 0.1% | DMEM | Ridgway, E., Klibanski, A., Marorana, M., Milbury, P., Kieffer, J., and Chin, W.: The Effect of Somatostatin on the Release of Thyrotropin and its Subunits from Bovine Anterior Pitituary Cells in Vitro, Endocrinology 112 (6), 1937, 1983 |
| 小鼠 | 小鼠, 雄性 | Pituitary | Collagenase: 0.4% | DMEM/Han's F12 | Steveson Tami C, Ciccotosto Giuseppe D, Ma Xin-Ming, Mueller Gregory P, Mains Richard E, Eipper Betty A: Menkes protein contributes to the function of peptidylglycine alpha-amidating monooxygenase, Endocrinology 144, 188-200, 2003 |
| Hyaluronidase: 0.1% | |||||
| Trypsin: 0.3% | |||||
| 綿羊 | 綿羊, 成年的 | Somatotropes | Collagenase Type 1: 0.3% | Medium 199 | Xu Ruwei, Wang Qinling, Yan Ming, Hernandez Maria, Gong Changhong, Boon WahChin, Murata Yoko, Ueta Yoichi, Chen Chen: Orexin-A augments voltage-gated Ca2+ currents and synergistically increases growth hormone (GH) secretion with GH-releasing hormone in primary cultured ovine somatotropes, Endocrinology 143, 4609-19, 2002 |
| Hyaluronidase: | |||||
| 大鼠 | 大鼠, 雄性, 12-15 周 | Pituitary | Collagenase Type 2: 0.4% | DMEM | Akieda-Asai, S., Zaima, N., Ikegami, K., Kahyo, T, Yao, I., Hatanaka, T., Iemura, S., Sugiyama, R., Yokozeki, T., Eishi, Y., Koike, M., Ikeda, K., Chiba, T., Yamaza, H., Shimokawa, I., Song, S., Matsuno, A., Mizutani, A., Sawabe, M. Chao, N., Tanaka, M., : SIRT1 Regulates Thyroid-Stimulating Hormone Release by Enhancing PIP5K gamma Activity through Deacetylation of Specific Lysine Residues in Mammals., PLoS ONE 5, e11755, 2010 |
| Deoxyribonuclease I: 0.04% | |||||
| 大鼠 | Wistar大鼠, 雄性, 2個月大 | Pituitary | Trypsin: 0.1% | DMEM | Zhou, X., De Schepper, J., De Craemer, D., Delhase, M., Gys, G., Smitz, J., and Hooghe-Peters, E.: Pituitary Growth Hormone Release and Gene Expression in Cafeteria-Diet-Induced Obese Rats, J Endocrinol 159, 165, 1998 |
| 大鼠 | SD大鼠, 雌性, 200 - 250克 | Anterior pituitary gland | Trypsin: 0.1% | EBSS, CMF | D'Emden, M. and Wark, J.: Culture Requirements for Optimal Expression of 1,25-Dihydroxyvitamin D3-Enhanced Thyrotropin Secretion, In Vitro Cell Dev Biol 27, 197, 1991 |
| 大鼠 | 大鼠 | Pituitary | Trypsin: 0.3 % | HEPES | Wilfinger, W., Larsen, W., Downs, T., and Wilbur, D.: An In Vitro Model for Studies of Intercellular Communication in Cultured Rat Anterior Pituitary Cells, Tissue Cell 16 (4), 483, 1984 |
| 大鼠 | SD大鼠, 雄性, 250-450克 | Anterior pituitary | Trypsin: 0.25% | Krebs | Portanova, R., Smith, D., and Sayers, G.: A Trypsin for the Preparation of Isolated Rat Anterior Pituitary, Proc Soc Exp Biol Med 133, 573, 1970 |
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