CCK-8細(xì)胞活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

上海起發(fā)生物科技有限公司（Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.）屬于上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司（2009年成立）旗下的子公司，成立的初衷是建立上海起發(fā)生物自有品牌，打造優(yōu)質(zhì)的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時(shí)，把好生物產(chǎn)業(yè)鏈中的國(guó)產(chǎn)生物試劑品質(zhì)關(guān)。未來(lái)讓每一個(gè)和我們一樣擁有民族情懷的企業(yè)，共同創(chuàng)世界優(yōu)秀的中國(guó)生物制造企業(yè)，圓夢(mèng)中國(guó)。

產(chǎn)品詳情

  產(chǎn)品描述

Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 細(xì)胞活性檢測(cè)試劑盒是一種廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性相關(guān)實(shí)驗(yàn)的快速、高靈敏度檢測(cè)試劑盒。

CCK-8 的主要成分為水溶性四唑鹽[Water Soluble Tetrazolium-8] (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)，Water Soluble Tetrazolium-8是一種類似于MTT 的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性的甲臜（Formazan，參考圖1)。

Water Soluble Tetrazolium-8被細(xì)胞內(nèi)脫氫酶生物還原后生成的甲臜能夠直接溶解在培養(yǎng)基中。活細(xì)胞的數(shù)目越多，則顏色越深。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

圖1. Water Soluble Tetrazolium-8分子結(jié)構(gòu)及CCK-8檢測(cè)原理

產(chǎn)品特點(diǎn)

1.   MTT 法生成的甲臜不是水溶性的，需要使用DMSO 等有機(jī)溶劑溶解；而CCK-8 產(chǎn)生的甲臜是水溶性的，省去了溶解步驟，因此減少了該操作步驟帶來(lái)的實(shí)驗(yàn)誤差。

2.   由于CCK-8 產(chǎn)生的甲臜是水溶性的，無(wú)需吸掉培養(yǎng)基后，再用DMSO 等有機(jī)溶劑溶解，非常適合用于懸浮細(xì)胞的活性測(cè)定。

3.   與MTT 方法相比，CCK-8 法線性范圍更寬，靈敏度更高。

4.    CCK-8 法對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性，可以多次測(cè)定，選取最佳測(cè)定時(shí)間。

5.    CCK-8 法無(wú)需配制，即開即用。

6.   CCK-8 法適合大規(guī)模、高通量的樣品檢測(cè)。

使用方法

使用方法

1.   在96 孔板中配制100 μL 的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24 小時(shí)（在37℃，5% CO₂的條件下）。

2.    向培養(yǎng)板加入10 μL 的待測(cè)藥物進(jìn)行處理。

3.  根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段時(shí)間 （例如：6, 12，24 或48 小時(shí)）。

注：如果不進(jìn)行藥物處理而直接測(cè)定細(xì)胞的活性，則不需要2-3 步驟，直接從第4 步操作。

4.    向每孔加入10 μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響O.D 值的讀數(shù)）。

5.   將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育2-4 小時(shí)。

6.   用酶標(biāo)儀測(cè)定在450 nm 處的吸光度。

7.   如果暫時(shí)不測(cè)定OD 值，可 以向每孔中加入10 μL 1% SDS（w/v） 溶液或者 0.1 M HCl 溶液，并蓋上培養(yǎng)板蓋子，在室溫條件下避光保存。24 小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。

實(shí)驗(yàn)案例分析

圖2. 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明：上海起發(fā)CCK8與同仁CCK8的測(cè)試效果幾乎相同。

注意事項(xiàng)

1.     由于96 孔板周圍一圈最容易蒸發(fā)，周圍一圈建議不用，改加PBS或水。

2.    CCK-8 檢測(cè)細(xì)胞活性的原理是通過(guò)檢測(cè)活細(xì)胞脫氫酶催化的反應(yīng)。如果待測(cè)體系中存在還原劑（例如一些抗氧化劑），可能會(huì)干擾檢測(cè)結(jié)果，需設(shè)法去除其影響。

3.  當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96 孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的最小接種量至少為1,000 個(gè)/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。檢測(cè)白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低，因此推薦接種量不低于2,500 個(gè)/孔 (100 μL培養(yǎng)基)，且加入CCK-8后孵育的時(shí)間長(zhǎng)一些。

4.   如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，培養(yǎng)基顏色發(fā)生變化，應(yīng)洗滌細(xì)胞更換培養(yǎng)基后再加CCK-8 檢測(cè)。

5.   酚紅和血清對(duì)本試劑盒的測(cè)定無(wú)明顯影響。培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計(jì)算時(shí)，通過(guò)扣除只含有培養(yǎng)基的對(duì)照孔中本底的吸光度而消除，因此不會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成影響。