Covidyte™ TF670
| 分子量 | 激發(fā)（納米） | 發(fā)射（納米） | 消光系數(shù)（cm -1 M -1） | 校正因子 (280 nm) |
| 3620.33 | 649 | 664 | 250000 | 0.027 |
冠狀病毒 (CoV) 可以感染人類和多種動物，引起廣泛的疾病。2019 年底，一種被稱為嚴重急性呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒 2 (SARS-CoV-2) 的冠狀病毒被確定為導(dǎo)致幾例呼吸系統(tǒng)疾病 (Covid19) 的原因。該病毒在全球范圍內(nèi)迅速傳播。它已經(jīng)感染了超過 100 萬人，Covid19 已造成 7 萬多人死亡（截至 2020 年 4 月 6 日）。目前，沒有任何具體有效的治療 Covid19 的選擇。目前，Covid19的臨床治療主要是對癥聯(lián)合對已上市的抗病藥物如瑞德西韋和抗生素進行再利用來治療繼發(fā)感染。Covidyte™ TF670 是一種包含 14 個氨基酸序列 (KTSAVLQSGFRKME) 的肽底物，可被冠狀病毒蛋白酶切割。dark-FRET 肽在 N 端和 C 端分別含有 Tide Quencher™ 5 (TQ5) 作為猝滅劑和 Tide Fluor™ 5 (TF5) 作為熒光供體，其中 TF5 的熒光在肽段被 TQ5 有效猝滅時完好無損。當肽被冠狀病毒蛋白酶水解時，TF5 片段會產(chǎn)生顯著增強的熒光，因為它的熒光不再被 TQ5 淬滅。TF5的熒光強度可以有效監(jiān)測冠狀病毒蛋白酶的活性。Covidyte™ TF670 是一種強大的高通量篩選工具，用于搜索冠狀病毒蛋白酶的抑制劑。TQ5-TF5 對已被證明是用于開發(fā) FRET 蛋白酶底物的極為有效的 FRET 對。與常用的 EDANS 底物（如 Covidyte™ EN450）相比，TF670 底物具有更強和更長的熒光，較少受有色化合物的干擾，而這些有色化合物通常會導(dǎo)致假陽性命中。
| 熒光酶標儀 | |
| 勵磁 | 640 納米 |
| 排放 | 680 納米 |
| 隔斷 | 660 納米 |
| 推薦板 | 純黑色 |
將 50 μL 的每種蛋白酶稀釋液添加到檢測板的各個孔中。
在每個蛋白酶稀釋液中加入 50 μL Covidyte™ TF670 工作溶液。
在 Ex/Em = 640/680 nm（截止 660 nm）處使用熒光讀板器監(jiān)測熒光增加。
| 0.1毫克 | 0.5毫克 | 1毫克 | 5毫克 | 10毫克 | |
| 1毫米 | 27.622 µL | 138.109 µL | 276.218 µL | 1.381 毫升 | 2.762 毫升 |
| 5毫米 | 5.524 µL | 27.622 µL | 55.244 µL | 276.218 µL | 552.436 µL |
| 10毫米 | 2.762 µL | 13.811 µL | 27.622 µL | 138.109 µL | 276.218 µL |
| 圖 1.蛋白酶在蛋白質(zhì)激活、細胞調(diào)節(jié)和信號傳導(dǎo)以及生成用于蛋白質(zhì)合成或在其他代謝途徑中利用的氨基酸中發(fā)揮重要作用。FRET 蛋白酶底物廣泛用于檢測蛋白酶活性，特別是對于通常需要長肽序列以實現(xiàn)最佳結(jié)合的病毒蛋白酶，例如冠狀病毒、HIV 和 HCV 蛋白酶。內(nèi)部猝滅的 FRET 肽底物被蛋白酶消化以產(chǎn)生高熒光肽片段。熒光增加與蛋白酶活性成正比。Tide Quencher™ 染料與我們明亮的 Tide Fluor™ 和 iFluor™ 染料一起被證明是開發(fā) FRET 蛋白酶底物以用于高通量篩選應(yīng)用的極其有效的淬滅劑。 |  圖 2. Covidyte™ TF670 的化學結(jié)構(gòu)。 |
