intronbio 25021說明書

i-Taq™ DNA Polymerase

i-Taq™DNA聚合酶

產(chǎn)品信息

描述

高純度i-Taq™PCR核心試劑盒，無論模板類型和反應(yīng)條件如何，均可顯示穩(wěn)定，的DNA擴增

• •94 KDa熱穩(wěn)定DNA聚合酶
• •高純度Taq DNA聚合酶
     - 去除大腸桿菌衍生的蛋白質(zhì)和DNA，可作為PCR來源
• •適用于從克隆DNA到人類基因組DNA的DNA
• •緩沖液優(yōu)化，以顯示良聚合酶活性，無論模板類型或反應(yīng)條件如何

i-Taq™DNA聚合酶是一種94kDa的熱穩(wěn)定DNA聚合酶，通過克隆Thermus aquaticus（菌株YT1）的聚合酶基因在大腸桿菌中表達。它去除了大腸桿菌來源的蛋白質(zhì)和DNA，它可以作為PCR中的污染物，是穩(wěn)定有效的DNA擴增產(chǎn)物?；蚪MDNA，cDNA等可以擴增至5Kb。PCR（聚合酶鏈反應(yīng)）是通過特異性重復(fù)特定DNA位點的合成來擴增試管中所需DNA分子的方法。結(jié)果，可以使用非常少量的DNA合成大量的DNA。當然，它廣泛用于基礎(chǔ)生物學(xué)，醫(yī)學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域。我們現(xiàn)在正在簡單快捷地擴大其在法醫(yī)，食品，環(huán)境衛(wèi)生和動植物檢驗領(lǐng)域的使用范圍。⁵⁸體外-10 倍。擴增的DNA可用于如下的各種實驗。根據(jù)實驗結(jié)果，可以應(yīng)用各種醫(yī)學(xué)研究。在開發(fā)該方法的早期，使用大腸桿菌DNA聚合物進行PCR，因此必須在每次變性時補充變性大腸桿菌的DNA聚合酶。然而，通過在PCR中使用從Thermus aquaticus分離的熱穩(wěn)定DNA聚合酶，我們不必每一步都做補充酶的麻煩任務(wù)。結(jié)果，PCR成為分子生物學(xué)*的方法。PCR具有一系列三個步驟并重復(fù)30至40次。

PCR的步是DNA的變性，通過加熱分離兩條DNA鏈。每個分離的DNA用作模板，變性溫度取決于DNA中G + C的量和長度。PCR的第二步是退火。在此階段，引物與模板DNA結(jié)合，退火溫度是決定反應(yīng)準確性的重要因素。如果溫度太高，引物將與模板DNA結(jié)合得太弱。如果溫度太低，可以擴增不需要的DNA，因為引物非特異性結(jié)合。PCR的第三步是延伸步驟。在這個階段，耐熱DNA聚合酶將從模板DNA產(chǎn)生新的DNA。i-Taq™DNA聚合酶除高純度酶外，通過優(yōu)化緩沖液組合物以顯示良聚合酶活性，無論模板類型或模板的一半，都可以獲得高度可重復(fù)的結(jié)果。由于用該酶擴增的大多數(shù)產(chǎn)物在3端具有堿基A，因此可以將PCR產(chǎn)物原樣克隆到T載體中。它也可以通過用DNA聚合酶如Klenow DNA聚合酶或T4 DNA聚合酶填充它而將其磷酸化成平末端而克隆到平端載體中。

應(yīng)用

• 01基因組DNA，cDNA擴增至5kb
• 02T / A克隆或平端克隆

套件內(nèi)容

技術(shù)數(shù)據(jù)

靈敏度比較數(shù)據(jù)（與其他公司比較）

i-Taq TM DNA聚合酶與公司A，B相同功能的DNA聚合酶的靈敏度比較。在該實驗中，通過濃縮稀釋牛gDNA并用CSF引物擴增。

泳道M，100bp DNA標記; 泳道1,1ng gDNA; 泳道2,100pg gDNA; 泳道3,10pg gDNA; 泳道4,1 gg gDNA; 泳道5,100fg gDNA; 泳道N，陰性對照

批次穩(wěn)定性數(shù)據(jù)

確認了每批i-Taq TM DNA聚合酶的靈敏度活性。從連續(xù)稀釋的SNU-1 cDNA和λDNA中擴增GAPDH（575bp）和1Kb片段以確認靈敏度。使用1單位的i-Taq TM DNA聚合酶擴增總共20ml反應(yīng)混合物，并通過瓊脂糖凝膠電泳分析5ml。

泳道M，100bp DNA標記; 1 Kb DNA標記; 泳道N，陰性對照